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您(nín)的(dí)位置(zhì):首頁 > 技(jì)術(shù)文章(zhāng) > 穿梭箱實驗在小(xiǎo)鼠主(zhǔ)動(dòng)回(huí)避學(xué)習(xí)中的作用

穿(chuān)梭(suō)箱實驗(yàn)在(zài)小鼠主動回(huí)避學(xué)習(xí)中的(dí)作(zuò)用

時間:2021-09-22 點擊:1855次(cì)

目(mù)前(qián),對於該(gāi)腦區在主(zhǔ)動回(huí)避(bì)學習(xí)中的(dí)調節機製(zhì)尚未*明(míng)確。目(mù)的(dí):探索(suǒ)中(zhōng)腦導水管(guǎn)周圍灰(huī)質(zhì)氨(ān)基丁酸(suān)(y-Aminobutyricacid,GABA)能神經元在(zài)主動(dòng)回(huí)避學習(xí)中的調(tiáo)控作(zuò)用。方法(fǎ):通過穿梭箱實驗(yàn),對實驗小鼠進(jìn)行主(zhǔ)動回避訓(xùn)練;通過早期即刻基因c-fos免(miǎn)yi熒光染色確定小鼠PAG內c-fos表達的變化;利(lì)用腦立(lì)體定(dìng)位(wèi)注射(shè),將攜帶有hM3Dq或(huò)hM4Di基(jī)因的(dí)重(zhòng)組腺(xiàn)相(xiāng)關(guān)病(bìng)毒(dú)定位(wèi)注射於(yú)Vgat-cre轉(zhuǎn)基(jī)因小(xiǎo)鼠的PAG內,待2-3周(zhōu)後(hòu)GABA能神(shén)經(jīng)元穩定表(biǎo)達(dá)hM3Dq或hM4Di。製備300|im厚度(dù)的(dí)PAG離體腦片,進行全(quán)細胞膜(mó)片(piàn)鉗記(jì)錄(lù),記錄(lù)CNO對GABA能神(shén)經元(yuán)活(huó)動的調(tiáo)節。應(yīng)用(yòng)化學遺傳學技術,在(zài)清醒小(xiǎo)鼠(shǔ)體(tǐ)內特異性(xìng)激活(huó)或者抑製(zhì)PAG的GABA能神經(jīng)元(yuán),觀察(chá)改(gǎi)變(biàn)GABA能神經(jīng)元的(dí)活動(dòng)對小鼠主動(dòng)回(huí)避學習能力的(dí)影(yǐng)響(xiǎng);結果(guǒ):Vgat-ChR2-EYFP轉基因小鼠(shǔ)在(zài)主動(dòng)回(huí)避(bì)學(xué)習中存(cún)在(zài)延遲建立的特(tè)性;主(zhǔ)動回(huí)避學習(xí)中,與正常小鼠(shǔ)相(xiāng)比(bǐ),建(jiàn)立遲(chí)緩的小鼠(shǔ)PAG內GABA能神經(jīng)元激(jī)活(huó)的(dí)數量增多;PAG內表達(dá)hM3Dq的GABA能神(shén)經元被其配(pèi)體(tǐ)**氯(lǜ)氮(dàn)平-N-氧化(huà)物(Clozapine-N-oxide,CNO)特(tè)異(yì)性(xìng)激活,動作(zuò)電(diàn)位發(fā)放頻率增加(jiā),表達hM4Di的GABA能神(shén)經元被CNO特異性(xìng)抑製,神(shén)經元(yuán)動作(zuò)電位的發放(fàng)頻率(shuài)降(jiàng)低;在(zài)主(zhǔ)動回(huí)避學(xué)習過程(chéng)中(zhōng),使用CNO特異(yì)性激活(huó)PAG的(dí)GABA能神經元(yuán)可(kě)以(yǐ)延(yán)緩主(zhǔ)動(dòng)回避學(xué)習過(guò)程,使用CNO特(tè)異性(xìng)抑製PAG的GABA  
能神(shén)經(jīng)元(yuán)並(bìng)不影響(xiǎng)主動回(huí)避行(háng)為的建立。結(jié)論(lùn):Vgat-ChR2-EYFP轉(zhuǎn)基(jī)因(yīn)小鼠存在主動回避學(xué)習障(zhàng)礙,PAG的(dí)GABA能神經(jīng)元(yuán)調(tiáo)節主動回避(bì)行(háng)為的建立(lì),激(jī)活(huó)PAG的GABA能神(shén)經元(yuán)可(kě)以(yǐ)起到延(yán)緩主(zhǔ)動回(huí)避(bì)行(háng)為建(jiàn)立的作用。

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