動(dòng)物的認知功能(néng)需要(yào)通(tōng)過(guò)對其(qí)學習記(jì)憶(yì)的(dí)情(qíng)況進行(háng)評價，因此(cǐ)需要建(jiàn)立規範的行(háng)為(wéi)學實驗(yàn)方法，從而準(zhǔn)確判斷其(qí)學習(xí)記(jì)憶(yì)的(dí)情況(kuàng)。根據齧齒(chǐ)類動物具有喜歡(huān)探(tàn)索(suǒ)陌(mò)生事(shì)物(wù)的天性，Ennaceur和Delacour於1988年報道了一(yī)種非(fēi)獎(jiǎng)賞性(xìng)的(dí)，簡單(dān)的認知(zhī)記(jì)憶實驗模型(xíng)———新物體(tǐ)與新(xīn)位(wèi)置識別實(shí)驗，用於檢測齧(niè)齒(chǐ)類動物的(dí)記憶能力(lì)。該模型根(gēn)據(jù)動物對見過的熟悉(xī)物體(tǐ)和(hé)沒有見(jiàn)過的(dí)新物(wù)體的(dí)探(tàn)究時(shí)間的(dí)長短來評(píng)價被(bèi)測試(shì)動物的記(jì)憶能(néng)力(lì)，即當被(bèi)測試動物未遺忘環(huán)境(jìng)中(zhōng)見(jiàn)過的熟悉(xī)物體(tǐ)時，便(biàn)會用更多(duō)的(dí)時(shí)間(jiān)探究沒(méi)有見過的新(xīn)物(wù)體;當被測試(shì)動(dòng)物遺(yí)忘了見過的(dí)熟悉(xī)物體，則動物(wù)對(duì)環境中沒(méi)有(yǒu)見(jiàn)過(guò)的(dí)新(xīn)物體(tǐ)和(hé)見過的熟悉(xī)物(wù)體的探究時(shí)間應(yīng)基(jī)本相同。與(yǔ)其它動物(wù)行為(wéi)學實驗方法相比，新物體識別實驗具有不需(xū)要外(wài)部推(tuī)動力(lì)，隻需要(yào)適(shì)當的訓(xùn)練(liàn)即可(kě)完(wán)成(chéng)，且具有實驗時間短的優(yōu)點(diǎn)，受到越(yuè)來(lái)越多的學者(zhě)的(dí)關注(zhù)。但由於新物體識別實(shí)驗缺(quē)乏統一的(dí)實驗標(biāo)準，使(shǐ)其(qí)應(yīng)用受(shòu)到一定的限製(zhì)。以往研究針對(duì)物(wù)體材質(zhì)，時間(jiān)間隔等具(jù)體(tǐ)檢(jiǎn)測條件進(jìn)行，但缺少(shǎo)對(duì)行(háng)為箱形(xíng)狀的研究(jiū)，為了(liǎo)進(jìn)一(yī)步規(guī)範該方法的(dí)實驗標準，本(běn)研究針對(duì)新物(wù)體實(shí)驗方法(fǎ)中的實驗(yàn)行(háng)為(wéi)箱(xiāng)形狀對實驗(yàn)結果的影響(xiǎng)進行(háng)考察(chá)。  

1，材(cái)料與方法  

1.1實(shí)驗動(dòng)物及(jí)飼(sì)養環境  

健康ICR小(xiǎo)鼠(shǔ)，8周(zhōu)齡(líng)，40隻，雌雄(xióng)各(gè)半(bàn)，體(tǐ)質(zhì)量(liáng)24～26g，購(gòu)自長(cháng)春(chūn)億斯實(shí)驗動(dòng)物(wù)技(jì)術有限責(zé)任公(gōng)司［實(shí)驗動(dòng)物(wù)生(shēng)產許(xǔ)可證號(hào):SCXK(吉)-2011-0004］。遵(zūn)照國家(jiā)實驗(yàn)動物(wù)飼(sì)養和(hé)使用指南(nán)，將小鼠(shǔ)飼養(yǎng)在(zài)屏障(zhàng)環境中(zhōng)，控製溫(wēn)度在(zài)(22±1)℃，12h明暗(àn)循環，自由(yóu)采食(shí)和飲水，預飼(sì)期1周。  

1.2實驗儀(yí)器(qì)  

小鼠自主(zhǔ)活動儀和小(xiǎo)鼠(shǔ)新(xīn)物體(tǐ)識別實驗箱(xiāng)。  

1.3實驗(yàn)動(dòng)物(wù)分(fēn)組(zǔ)  

ICR小鼠(shǔ)40隻隨(suí)機分(fēn)為2組，每(měi)組20隻，雌雄各(gè)半(bàn)，即(jí)方組(zǔ)(n=20)和圓組(n=20)。各組按性(xìng)別(bié)再(zài)次隨機分為2組(zǔ)，即(jí)方雌組(zǔ)(n=10)，方雄(xióng)組(n=10)，圓雌組(n=10)和(hé)圓(yuán)雄組(n=10)。  

1.4新物(wù)體(tǐ)實(shí)驗方(fāng)法  

實(shí)驗(yàn)前(qián)5d，實(shí)驗人員(yuán)每天將小鼠放(fàng)到手(shǒu)上(shàng)撫觸5min，消除(chú)小鼠(shǔ)的緊(jǐn)張恐懼(jù)感。實(shí)驗(yàn)前，通(tōng)過(guò)小鼠自主(zhǔ)活動(dòng)儀篩選(xuǎn)，剔(tī)除活(huó)動(dòng)異(yì)常的小(xiǎo)鼠(shǔ)(活動(dòng)過少(shǎo)，活動過(guò)多，轉圈等)。實驗(yàn)當(dāng)天(tiān)，先(xiān)將(jiāng)小鼠(shǔ)放到(dào)實驗室(shì)，讓其適應(yīng)環境1h，然後進(jìn)行正(zhèng)式(shì)實(shí)驗(yàn)。  

新(xīn)物(wù)體識別(bié)實驗(yàn)包(bāo)含(hán)三個階段(圖1)。階段(duàn)1(T1):分別(bié)將(jiāng)小鼠單獨(dú)放入敞開的行(háng)為(wéi)箱(xiāng)(底邊長44cm×44cm的方(fāng)形行為箱或半(bàn)徑(jìng)為(wéi)25cm的圓(yuán)形(xíng)行(háng)為箱)中(zhōng)，自由探索5min。探索完(wán)畢(bì)後將(jiāng)小鼠(shǔ)取(qǔ)出(chū)，放回飼養(yǎng)籠中(zhōng)。清理行為箱(xiāng)中小鼠的(dí)糞尿，75%酒(jiǔ)精(jīng)擦拭，消(xiāo)除異味。本階段在實驗(yàn)第yi天上午(wǔ)，下午分別進行一次。階(jiē)段2(T2):分別在行為(wéi)箱的兩個相對的(dí)區域(yù)中放入(rù)2個*相同的(dí)物體(物(wù)體1和1’)，再次(cì)將(jiāng)小(xiǎo)鼠(shǔ)放(fàng)入行為(wéi)箱中探(tàn)索(suǒ)5min。每(měi)次實(shí)驗結(jié)束(shù)後(hòu)，*清理(lǐ)行為箱。本(běn)階(jiē)段實(shí)驗(yàn)在第er天上午進行(háng)。階(jiē)段3(T3):物體1不變(biàn)(舊物體)，物體(tǐ)1’更換為物體2(新(xīn)物體)，再(zài)次(cì)將小鼠放入行為(wéi)箱中探(tàn)索(suǒ)5min。每次實(shí)驗結(jié)束(shù)後，*清理(lǐ)行為箱(xiāng)。本階段實(shí)驗在(zài)第(dì)er天(tiān)下午進行(háng)。所有(yǒu)實(shí)驗(yàn)均在上(shàng)午8點(diǎn)至(zhì)下(xià)午5點(diǎn)之(zhī)間進行。  

采(cǎi)用SuperMaze動物(wù)運(yùn)動軌(guǐ)跡(jì)跟蹤(zōng)係統(tǒng)記錄分析(xī)T2和T3中小鼠分別(bié)探索2個(gè)物(wù)體的(dí)時(shí)間，其中(zhōng)探(tàn)索(suǒ)物體1的(dí)時(shí)間記(jì)為F，探(tàn)索(suǒ)物體1’或(huò)2的(dí)時(shí)間記為(wéi)N，探(tàn)索兩(liǎng)個(gè)物(wù)體(tǐ)的總時(shí)間(jiān)記(jì)為(wéi)F+N，計算小鼠對(duì)物體1’和2的分(fēn)辨比(discriminationratio，DR)［DR=N/(N+F)×100%］。探(tàn)索(suǒ)定(dìng)義(yì)為小(xiǎo)鼠麵朝物體，鼻子與(yǔ)該物體(tǐ)的(dí)距(jù)離≤2cm。  

1．5數據(jù)統計(jì)分析(xī)  

采用SPSS21.0forwindows統計軟(ruǎn)件(jiàn)包分析。數據(jù)用平(píng)均(jūn)值±標準差(chà)(x珋(liǔ)±s)表(biǎo)示。采用單(dān)因素方(fāng)差分析(xī)進(jìn)行多組(zǔ)間比較(jiào)，兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn);組內(nèi)比(bǐ)較用(yòng)配(pèi)對Studentt檢驗。以(yǐ)P＜0.05為(wéi)差(chà)異有統(tǒng)計學意義。  

2，結果  

2.1小鼠性別(bié)對(duì)新物(wù)體識別實驗(yàn)結果的影(yǐng)響(xiǎng)  

在(zài)T2階段，各行(háng)為箱中的(dí)實驗動(dòng)物對物(wù)體1和1’的探(tàn)究(jiū)時間:(31.16±16.75)s，(30.97±16.50)s;(30.37±15.95)s，(31.73±15.10)s;(112.33±48.26)s，(112.50±49.76)s;(112.61±47.93)s，  

(112.32±47.10)s基(jī)本(běn)相同(P＞0.05)，在(zài)T3階(jiē)段(duàn)，各行為箱(xiāng)中(zhōng)的(dí)實驗(yàn)動(dòng)物(wù)對物體2的(dí)探(tàn)索(suǒ)時間顯著長(cháng)於(yú)對物體(tǐ)1的探索時間(jiān)(P＜0.05)見(jiàn)圖2，但(dàn)相(xiāng)同形(xíng)狀(zhuàng)的(dí)行為箱(xiāng)(方形(xíng)行(háng)為箱，圓形行(háng)為箱)中不同(tóng)性(xìng)別小(xiǎo)鼠(shǔ)對2號新物體的(dí)DR無顯著性差(chà)異(yì)(P＞0.05)  

2.2行(háng)為(wéi)箱(xiāng)形狀(zhuàng)對(duì)新物體(tǐ)識別實驗結(jié)果(guǒ)的影響(xiǎng)  

在(zài)T2階(jiē)段，不同(tóng)形(xíng)狀行為箱中小(xiǎo)鼠對兩物(wù)體在5min內探索時間(30.76±15.93)s，(31.35±15.40)s;(112.47±46.81)s，(112.41±47.16)s的差異未達到顯(xiǎn)著(zhù)水平(P＞0．05);在(zài)T3階段，小鼠對2號(hào)物(wù)體(tǐ)的探(tàn)索時間(jiān)顯(xiǎn)著(zhù)長(cháng)於1號(hào)物體，但(dàn)兩種(zhǒng)形狀(zhuàng)行為箱(xiāng)中小(xiǎo)鼠(shǔ)對新物體(tǐ)的分(fēn)辨(biàn)比(bǐ)無顯著差(chà)異(P＞0．05)見圖(tú)4。T2，T3兩(liǎng)階(jiē)段(duàn)中(zhōng)，圓形(xíng)行為箱(xiāng)中(zhōng)小鼠對兩(liǎng)物體的探索(suǒ)總時間(jiān)(224.88±37.05)s，(229.15±33.38)s顯著(zhù)長於(yú)方(fāng)形(xíng)行(háng)為箱(xiāng)中小鼠對(duì)兩物體的總(zǒng)探(tàn)索時(shí)間(62.11±23.30)s，(65.58±22.40)s(P＜0.01)  

3，討(tǎo)論(lùn)  

新物(wù)體(tǐ)識(shí)別實(shí)驗是在(zài)模(mó)仿測(cè)試人類失(shī)憶症(zhèng)的(dí)識(shí)別任(rèn)務的基礎上發展起來(lái)的(dí)，評價的(dí)是(shì)齧齒(chǐ)動物(wù)對(duì)物體的(dí)識(shí)別記憶能(néng)力(lì)。該(gāi)模型(xíng)是建(jiàn)立在齧(niè)齒(chǐ)動(dòng)物對新異物體的(dí)自(zì)發(fā)探(tàn)索(suǒ)行為(wéi)的(dí)基礎(chǔ)上(shàng)，且(qiě)該模型(xíng)不(bù)像(xiàng)迷宮學習(xí)中必須(xū)剝奪動物飲(yǐn)食或在避(bì)免水(shuǐ)淹(yān)動(dòng)機下進(jìn)行學(xué)習記憶(yì)，也不(bù)像被動(dòng)回(huí)避(bì)測試中(zhōng)給(gěi)予動(dòng)物電擊等負性強(qiáng)化(huà)讓(ràng)動(dòng)物學(xué)習(xí)記憶(yì)。所(suǒ)以該模(mó)型Zui大的(dí)優點就在(zài)於(yú)可以(yǐ)讓(ràng)動(dòng)物在(zài)*自然的(dí)狀態(tài)下進行(háng)學習記(jì)憶測試(shì)，能(néng)夠(gòu)更(gēng)好地模擬人(rén)類和靈長類動(dòng)物的(dí)學(xué)習記憶行(háng)為(wéi)。因(yīn)此，該(gāi)模型(xíng)越來(lái)越多地用(yòng)在評估(gū)藥wu對(duì)記憶的(dí)作(zuò)用(yòng)研究(jiū)上。  

在新物(wù)體(tǐ)實驗方(fāng)法的使用中，如何規(guī)範實驗(yàn)流程(chéng)，建(jiàn)立實驗動物行(háng)為學評(píng)價標準(zhǔn)成了實驗的核(hé)心(xīn)問題。本(běn)實驗通(tōng)過比較采(cǎi)用不(bù)同形狀的行(háng)為(wéi)箱進(jìn)行(háng)新(xīn)物體(tǐ)實(shí)驗(yàn)時結果的差(chà)異，推(tuī)斷(duàn)行為(wéi)箱形(xíng)狀(zhuàng)對實(shí)驗(yàn)結果有一(yī)定的影響(xiǎng)。本(běn)實驗中，T2階段的兩個物體*相同(tóng)，且對(duì)於小鼠來說(shuō)均(jūn)為首ci接(jiē)觸，因(yīn)此各組小(xiǎo)鼠對(duì)物體(tǐ)的DR值(zhí)均在50%左右(yòu)，表明實驗動物(wù)無位(wèi)置(zhì)偏愛異(yì)常發(fā)生(shēng)，即實驗動物(wù)對兩(liǎng)個不(bù)同位置上的相同(tóng)物(wù)體興趣相(xiāng)同(tóng)。T3階(jiē)段(duàn)，小(xiǎo)鼠(shǔ)對2號物(wù)體的探索時間顯著(zhù)長(cháng)於1號(hào)物體，說(shuō)明(míng)實(shí)驗(yàn)中選用的新(xīn)物(wù)體引(yǐn)起了(liǎo)小(xiǎo)鼠(shǔ)的探索興(xīng)趣(qù)，物體(tǐ)的選擇正(zhèng)確。  

各行(háng)為箱(xiāng)中(zhōng)，雌(cí)雄小鼠對(duì)新物體的分(fēn)辨比無差(chà)異(yì)，表(biǎo)明不同性(xìng)別(bié)的(dí)實驗(yàn)小鼠(shǔ)對(duì)新物體(tǐ)的(dí)分(fēn)辨程度相(xiāng)同，即(jí)性別(bié)不(bù)影響(xiǎng)對新物體識別(bié)實(shí)驗結果。進一步的(dí)實驗(yàn)結果(guǒ)，在(zài)T3階段(duàn)中(zhōng)，不(bù)同(tóng)形狀(zhuàng)的(dí)行為箱中的實驗動(dòng)物均能對(duì)新物(wù)體(tǐ)顯(xiǎn)示出(chū)積極的(dí)探(tàn)索興趣(qù)，分辯比相(xiāng)似，表明行(háng)為箱的形狀(zhuàng)差(chà)異(yì)不(bù)影響(xiǎng)實(shí)驗動物對新(xīn)物體(tǐ)識別行為(wéi)。但實驗(yàn)動物(wù)在兩種形狀的(dí)行為(wéi)箱(xiāng)中(zhōng)的(dí)總(zǒng)探索(suǒ)時間存在差異(yì)，說明(míng)行為(wéi)箱的形狀對實驗(yàn)動(dòng)物的(dí)活動(dòng)程度有(yǒu)一定的(dí)影(yǐng)響(xiǎng)。這(zhè)可能是(shì)由(yóu)於方(fāng)形行(háng)為箱的(dí)角(jiǎo)落效應(yīng)造成(chéng)的(dí)。  

研究(jiū)結(jié)果表明(míng)，雖然(rán)在兩(liǎng)種(zhǒng)不同形狀的(dí)行(háng)為箱中進行的(dí)新物(wù)體(tǐ)識別實驗(yàn)，動(dòng)物(wù)對新(xīn)物體(tǐ)識(shí)別(bié)結(jié)果(guǒ)無差異(yì)，但為(wéi)了避(bì)免(miǎn)角落造成(chéng)的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物(wù)活動(dòng)能(néng)力(lì)降(jiàng)低現象的發生，我們認(rèn)為(wéi)采用圓形(xíng)行為箱進行(háng)新(xīn)物體識別實驗能夠更準(zhǔn)確地反(fǎn)應實(shí)驗(yàn)動(dòng)物(wù)對(duì)新(xīn)物(wù)體的識別(bié)能力(lì)。