一，實驗目(mù)的(dí)

1．了解(jiě)一級(jí)菌種培(péi)養(yǎng)基(jī)配製(zhì)的原則(zé)；

2．掌(zhǎng)握一(yī)級菌(jūn)種(zhǒng)培養基(jī)配(pèi)製的工(gōng)藝(yì)流程(chéng)；

3．學(xué)會一(yī)級(jí)菌種(zhǒng)培(péi)養(yǎng)基配製(zhì)的(dí)具(jù)體方法步驟(zhòu)；

4．學(xué)會棉塞(sāi)的(dí)製作方法和手提(tí)式高壓(yā)蒸汽鍋(guō)的使用方(fāng)法。

二，實(shí)驗(yàn)設備，工具和材(cái)料

手(shǒu)提式高(gāo)壓鍋(guō)，1000～1500W電(diàn)爐(lú)，感量1／10g的(dí)粗天平(píng)，1000mL量杯(bēi)，玻璃(lí)漏(lòu)鬥，漏鬥(dǒu)架各(gè)一(yī)個，8～10cm長乳膠管一根(gēn)，止流夾一個，20mm×200mm試(shì)管150支左(zuǒ)右，鐵(tiě)絲(sī)筒兩(liǎng)個，小刀和剪子(zǐ)一(yī)把(bǎ)，普通棉(mián)花(huā)250g，牛皮紙(zhǐ)，馬(mǎ)鈴薯，瓊(qióng)脂(zhī)和葡萄糖或蔗(zhè)糖適(shì)量。

三(sān)，實(shí)驗步(bù)驟

(1)取(qǔ)適量馬鈴(líng)薯，削(xiāo)去(qù)皮，挖去(qù)芽(yá)眼(yǎn)。稱取200g，切(qiē)成薄片或小塊，用清水(shuǐ)淘洗之(zhī)後(hòu)，放入(rù)鍋內，加(jiā)水(shuǐ)1200mL，用(yòng)文火煮(zhǔ)沸(fèi)20～30min，用(yòng)四(sì)層紗布(bù)過濾(lǜ)，取濾液1000mL，如(rú)不(bù)足加水(shuǐ)補(bǔ)足1000mL。

(2)稱取(qǔ)瓊脂(zhī)20g，洗淨(jìng)剪(jiǎn)碎(suì)，加入馬鈴薯煮出液(yè)中，用(yòng)文(wén)火(huǒ)加熱，邊煮(zhǔ)邊攪拌，直(zhí)至全部(bù)瓊脂融化，再用四(sì)層(céng)紗(shā)布(bù)過(guò)濾(lǜ)，並(bìng)用(yòng)熱(rè)水補足(zú)1000mL，加入預(yù)先溶解(jiě)的(dí)葡萄糖(táng)水，攪(jiǎo)拌之後煮(zhǔ)2min後停火(huǒ)。

(3)分(fēn)裝(zhuāng)試管。根(gēn)據要(yào)求，用1%鹽酸(suān)或(huò)1%*溶液調(tiáo)整酸鹼度(dù)後(hòu)，將(jiāng)培養(yǎng)基(jī)趁(chèn)熱分(fēn)裝在試(shì)管(guǎn)中。

先在(zài)玻(bō)璃漏鬥嘴(zuǐ)上套一段(duàn)長(cháng)8～10cm的乳(rǔ)膠管，卡上止流夾，將(jiāng)培養基倒入(rù)漏鬥中(zhōng)（其(qí)餘培養(yǎng)基(jī)要置電爐上(shàng)保溫）。左(zuǒ)手握(wò)住3～5支試管(guǎn)，讓乳膠(jiāo)管(guǎn)伸入(rù)試(shì)管(guǎn)中(zhōng)部(bù)，右手拇(mǔ)指(zhǐ)和食(shí)指(zhǐ)按下(xià)止流夾(jiā)，逐一注(zhù)入(rù)培養(yǎng)基，裝入量以(yǐ)試管長(cháng)度的1/5～1／4為宜。分(fēn)裝時(shí)不要讓(ràng)培養基沾(zhān)在試(shì)管口上，若(ruò)已(yǐ)沾上，要用(yòng)幹淨紗(shā)布擦幹(gān)淨。

(4)塞棉塞(sāi)。培(péi)養基分(fēn)裝(zhuāng)試(shì)管(guǎn)後，要塞(sāi)上(shàng)棉塞。

製作棉塞(sāi)的方法很多，這裏(lǐ)介紹一(yī)種常(cháng)用的(dí)方法。取適量棉(mián)片(piàn)，在(zài)桌(zhuō)上(shàng)鋪成長12～15cm，寬(kuān)12cm左右的薄棉(mián)墊，先將(jiāng)棉墊(diàn)下(xià)部(bù)1／3向上折疊，再將上部(bù)1／3向下折(zhē)疊，然後(hòu)將長(cháng)棉(mián)墊(diàn)逆時(shí)針(zhēn)方(fāng)向(xiàng)轉90°，讓光(guāng)滑的(dí)一邊向左用右(yòu)手持棉墊並用(yòng)拇指(zhǐ)按住(zhù)，左手(shǒu)拇指(zhǐ)和食(shí)指向外旋卷，並將參差不齊的棉(mián)纖維(wéi)纏住呈(chéng)一(yī)圓(yuán)柱形(xíng)。用(yòng)右手按順時針方(fāng)向(xiàng)將棉塞塞進管口(kǒu)內，塞(sāi)入(rù)部(bù)分(fēn)為(wéi)棉塞(sāi)長度(dù)的(dí)2/3。

(5)捆紮(zā)試管(guǎn)。塞好棉塞(sāi)之後(hòu)，應(yīng)將(jiāng)試管(guǎn)捆成束(shù)，並用牛皮紙(zhǐ)將棉塞(sāi)部分包紮好，裝(zhuāng)進(jìn)高(gāo)壓鍋內滅菌(jūn)。

(6)滅菌。用手(shǒu)提(tí)式(shì)高壓蒸汽(qì)滅菌鍋(guō)滅(miè)菌(jūn)。其(qí)步(bù)驟如下(xià)。

①加水。先(xiān)向(xiàng)鍋內(nèi)加水，略(lüè)超過(guò)支架(jià)。

②裝(zhuāng)鍋(guō)。將(jiāng)包(bāo)紮好的(dí)試管(guǎn)直(zhí)立放(fàng)在內(nèi)筒中，不(bù)要裝得過緊，過(guò)滿。

③關嚴(yán)鍋(guō)蓋。先將軟(ruǎn)管對(duì)好(hǎo)內筒插孔，蓋(gài)嚴鍋(guō)蓋，對(duì)角旋緊旋鈕(niǔ)。

④加(jiā)熱(rè)。插上電爐插(chā)頭或推上電閘加熱。

⑤排放(fàng)冷(lěng)空(kōng)氣(qì)。開始加熱(rè)時將(jiāng)放(fàng)氣閥打開，待看到有大量蒸(zhēng)汽(qì)排(pái)出(chū)後(hòu)關(guān)上放氣(qì)閥。

⑥升(shēng)壓保壓。排(pái)放(fàng)冷(lěng)空氣(qì)之後(hòu)，繼續(xù)加(jiā)熱，當壓(yā)力表指針達到(dào)0.11MPa時(shí)，開(kāi)始(shǐ)計時，維持30min。

⑦降壓排(pái)氣(qì)。維持30min之(zhī)後，拔下電(diàn)源插頭或拉(lā)開電(diàn)閘，使其自(zì)然冷卻(què)，或從電爐(lú)上(shàng)把鍋(guō)提下來(lái)，待壓力(lì)表指(zhǐ)針(zhēn)降到(dào)零時(shí)，打開放氣閥(fá)，排(pái)放蒸汽。

⑧出鍋(guō)。排完氣後(hòu)，鬆(sōng)開旋鈕，將鍋(guō)蓋(gài)揭開(kāi)一(yī)小縫，待(dài)培(péi)養(yǎng)基溫度降(jiàng)至60℃左右(yòu)時(shí)，取出試(shì)管。

⑨擺(bǎi)斜(xié)麵。試(shì)管從(cóng)鍋內取(qǔ)出後(hòu)，要將(jiāng)試管(guǎn)一支一(yī)支(zhī)地散放(fàng)在(zài)桌麵上的(dí)小(xiǎo)木條(tiáo)上，使(shǐ)之冷卻(què)成(chéng)斜(xié)麵。斜麵(miàn)長(cháng)度(dù)為試(shì)管(guǎn)長度(dù)的2/3。

(7)空(kōng)白實驗。將(jiāng)滅菌後的斜麵試管，各組隨(suí)機(jī)抽取(qǔ)幾支(zhī)，放在28～32℃溫箱(xiāng)中(zhōng)空(kōng)白(bái)培養48～72h，如(rú)無(wú)任(rèn)何(hé)雜(zá)菌(jūn)生長，說明滅(miè)菌*，才可使(shǐ)用(yòng)。